发布时间：2025-06-25
在ELISA实验中，细胞裂解液的质量直接影响检测结果的准确性和可靠性。
如何高效制备细胞裂解液？今天我们就来详细解析操作步骤及注意事项，助你轻松搞定样本前处理！
1.细胞消化与收集
贴壁细胞处理：吸弃培养板中的培养基，加入胰蛋白酶消化细胞，待细胞脱落后，用新鲜培养基终止消化并冲洗收集细胞悬液（悬浮细胞可直接收集）。
离心去上清：将细胞悬液转移至离心管，4℃、1000×g离心5分钟，弃上清后，用预冷PBS轻柔洗涤细胞3次，彻底去除残留培养基（避免杂质干扰后续裂解）。
2.细胞重悬与裂解
PBS重悬细胞：按每1×10⁶个细胞加入150-250μL预冷PBS的比例重悬（可添加蛋白酶抑制剂，防止蛋白降解）。
裂解方法选择：
反复冻融法：将样本在-20℃/-80℃和室温间交替冻融3-5次，直至细胞完全裂解（适用于常规蛋白提取）。
超声破碎法：用超声波细胞破碎仪处理悬液，注意控制功率和时间，避免蛋白变性（适合对温度敏感的蛋白）。
3.离心去杂与上清收集
裂解后的样本需在4℃、1500×g离心10分钟，弃沉淀（细胞碎片及未裂解组分），将上清液转移至新离心管中。
此时上清即为细胞裂解液，可直接用于ELISA检测或分装保存于-80℃（避免反复冻融）。
4.注意事项
全程低温操作：使用预冷PBS和离心机，降低蛋白酶活性，保护目标蛋白。
蛋白酶抑制剂：建议临用前加入，尤其对磷酸化蛋白或易降解蛋白至关重要。
样本均一性：裂解后充分混匀，避免浓度差异影响ELISA结果。
5.常见问题解答
问
裂解液中有沉淀怎么办？
答
可能是离心不彻底或裂解不完全，可提高离心力或延长裂解时间。
问
蛋白浓度过低？
答
检查细胞量是否充足，或调整裂解液体积，必要时用BCA法定量校准。
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