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WB 干货 | 一抗回收再利用：你的实验经费省了又省！

发布时间：2025-08-11

做Western Blot的小伙伴们都知道，一抗（Primary Antibody）可是实验中的“奢侈品”——价格不菲，用量却不少。每次用完直接扔掉？那可太心疼了！回收再利用就成了实验室里的常规操作。
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一、一抗回收：能省，但别乱省！

1.一抗回收的常见方式
回收一抗通常有两种方式：
4℃短期回收：做完WB后，把一抗从膜上回收，加叠氮化钠抑制细菌生长，放4℃保存。
-20℃长期冻存：如果短期内不用，可以冻存，但反复冻融可能会影响抗体活性。

2.能重复用多少次？
这个问题没有标准答案，但经验告诉我们：
普通一抗（如β-actin、GAPDH等）：通常可回收使用3-5次，甚至更多（取决于抗体质量和保存方式）。
高灵敏度/低丰度蛋白抗体：可能2-3次后信号就开始减弱，不建议过度回收。
磷酸化抗体（如p-AKT、p-ERK）：稳定性较差，一般1-2次后就要谨慎使用。
关键点：每次回收后，建议做个阳性对照，看看信号是否明显减弱，避免假阴性！


二、影响一抗寿命的4大因素

  1. 抗体本身的质量

    单克隆抗体通常比多克隆抗体更稳定，回收次数可能更多。

某些抗体（如磷酸化抗体）容易降解，回收后活性下降更快。

2.保存条件

4℃保存：适合短期（1-2个月），但需加NaN₃防污染。
-20℃冻存：长期保存可行，但反复冻融会损伤抗体。
分装冻存：如果抗体很珍贵，建议分装成小份，避免反复冻融。

3.实验操作

膜上残留的封闭液或洗涤液可能影响抗体稳定性，回收前建议用TBST稍微漂洗一下。

抗体稀释液：有些实验室会用含BSA或脱脂奶粉的稀释液，回收时可能带入杂质，影响下次使用。


4.抗体浓度

高浓度抗体（如1:1000稀释）：回收后可以继续使用，但信号可能会逐渐减弱。
低浓度抗体（如1:5000以上）：回收后可能需要适当提高浓度，否则信号可能不够强。


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三、如何判断回收的一抗还能不能用？

1看型号强度
每次回收后，跑个阳性对照，对比新旧信号：
如果条带依然清晰，恭喜，还能继续用！
如果信号明显变弱，建议换新抗体，否则可能影响实验结果。

2看背景噪音
如果回收后背景变高，可能是抗体降解或污染，建议弃用。



四、实验室省钱小技巧

1.分装保存

新抗体到货后，按50-100μL/管分装冻存，避免反复冻融。

2.优化抗体稀释比例

有些抗体说明书建议1:1000，但实际1:2000也能用，可以试试最低有效浓度，延长使用次数。

3.用便宜的抗体做预实验

如果只是做初步筛选，可以先用性价比高的抗体，确认目标蛋白后再用高端抗体。

4.和实验室小伙伴“拼抗体”

如果实验频率不高，可以和同课题组的同学共用抗体，减少浪费。


回收一抗，理性省钱！


✅ 普通抗体（如内参）：可回收3-5次，但每次都要做对照验证。
⚠️ 高灵敏度：建议1-2次后更换，避免信号丢失。
❌ 出现信号减弱、背景升高：立刻停用，别因小失大！

记住： 抗体回收是为了合理节省经费，而不是牺牲实验质量。该省则省，该换则换，才能让WB跑得又稳又漂亮！


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不想频繁回收抗体？试试优品生物的高稳定性WB抗体！

虽然回收抗体能省钱，但如果抗体本身稳定性差，回收几次后信号就没了，反而得不偿失。优品生物的采用高纯度制备工艺，具有以下优势：
✔ 高特异性——条带清晰，背景干净，减少假阳性困扰
✔ 高稳定性——4℃保存时间长，回收后信号衰减慢
✔ 多种包装规格——提供小包装（如20μL试用装），避免浪费
✔ 覆盖全面——内参、磷酸化抗体、稀有靶点一应俱全

与其反复回收不稳定的抗体，不如一开始就选择更耐用的！