发布时间：2026-07-24
细胞自噬通路在胚胎发育、细胞增殖、干细胞维持及肿瘤发生中发挥核心调控作用。该通路的关键抗体如ATG5、Beclin 1、LC3B及p62等是相关研究中的常用工具。然而，研究者在实际WB实验中常面临以下共性挑战：
分子量多样性：通路中不同蛋白分子量跨度大（如ATG5 ~55 kDa，Beclin 1 ~52 kDa，LC3B ~14-16 kDa），单一电泳条件难以兼顾，尤其对小分子量蛋白分离效果易不佳。
翻译后修饰干扰：磷酸化（如Beclin 1磷酸化）或脂化修饰（如LC3-I向LC3-II转化）易导致条带迁移异常或出现多条带，影响数据判读。
丰度差异显著：基础自噬水平下，内源性ATG5和Beclin 1表达丰度中等，但在不同组织或处理条件下波动大，低表达样本中检出困难。
非特异性条带：部分抗体与非目标蛋白或聚集体（如ATG5-ATG12复合物）交叉反应，出现额外条带。
测评维度：
本次测评我们选取该通路中的2个核心指标进行平行测试：
ATG5（自噬关键E3样酶，~55 kDa）
Beclin 1（自噬核心调控因子，~52 kDa）
指标：ATG5
主流品牌：Abcam、CST
国产品牌：优品生物
指标：Beclin 1
主流品牌：Abcam、CST
国产品牌：优品生物
高特异性：优品生物ATG5及Beclin 1抗体在对应KO细胞中均无阳性条带，且与ATG家族其他成员（如ATG7、ATG12）无明显交叉反应，背景洁净，条带位置准确。
关键指标媲美进口品牌：在特异性、灵敏度（最低检出限可达10-20 μg总蛋白）及背景控制上，优品生物表现与进口品牌持平，内源性检测信号强劲。
分子量验证可靠：检测到的ATG5（~55 kDa）及Beclin 1（~52 kDa）条带位置与预期一致，无异常偏移，未受非特异性复合物干扰。
更具性价比：以进口品牌30-50%的价格提供同等甚至更优的检测效果，尤其适合自噬通路多指标联合检测（如同时检测ATG5、Beclin 1及LC3B）。
优品生物基于数千次通路WB实验经验，提供以下优化方案：
样本制备：
使用RIPA（含SDS）强裂解液提取总蛋白，检测Beclin 1时建议使用含去垢剂的裂解液以充分提取膜结合蛋白。
必须添加磷酸酶抑制剂（PhosSTOP）和蛋白酶抑制剂，防止自噬相关蛋白降解或去磷酸化引起的分子量变化。
如需监测自噬流，建议加设氯喹或巴佛洛霉素A1处理组，以区分基础水平与诱导后表达变化。
电泳条件：
ATG5（~55 kDa）与Beclin 1（~52 kDa）分子量接近，推荐使用10% SDS-PAGE凝胶，100 V恒压电泳120分钟，可清晰分离两条带。
若需在同一膜上同时检测LC3B（~14-16 kDa），建议使用4-20%梯度凝胶改善小分子蛋白分离效果，并适当延长转膜时间（300 mA恒流，90分钟）。
抗体孵育：
推荐稀释比：ATG5 (1:1000)、Beclin 1 (1:1000)，使用5% BSA封闭，4℃过夜孵育。优品生物抗体信噪比高，可在低浓度下获得清晰条带。
问题排查：
若ATG出现~72 kDa额外条带，可能为ATG5-ATG12共价结合复合物，建议使用还原性上样缓冲液并充分煮沸，或同时检测ATG12抗体辅助判断。
若Beclin 1出现多条带或拖尾，可能为磷酸化修饰或降解产物，建议使用λ磷酸酶处理样本验证，并确保样本新鲜制备。
用户真实反馈
案例1（肿瘤发生研究，Beclin 1检测）
案例2（发育生物学，ATG5与Beclin 1联检）
优品生物细胞自噬通路抗体系列（覆盖核心蛋白ATG5、Beclin 1、LC3B及p62）均通过KO细胞验证+多批次测试+低丰度检出的专项验证体系。我们不仅提供单抗体，还可定制通路多指标WB检测方案。欢迎提交您的样本进行免费试用或个性化测评需求。
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