新闻聚焦
News

WB干货 | 蛋白条带都看见了，Marker却“隐身”了?

发布时间：2026-01-30

你的Marker，是不是在跟你玩捉迷藏？

图片

辛辛苦苦跑完电泳，小心翼翼完成转膜，满怀期待地开始显色——目标蛋白条带清晰可见，可旁边的Marker却“集体失踪”，或者只剩几个模糊的影子。
这种“偏科”的现象让人哭笑不得：实验算成功还是失败？分子量怎么确定？没有Marker参照，这结果还敢用吗？

别急，今天我们就来解开这个谜题，让你的Marker和蛋白条带一起“亮相”。

Marker的“双重身份”：它不只是尺子

首先，我们要明白Marker在WB实验中的双重作用：

分子量标尺：判断目标蛋白大小
转膜质检员：验证转膜效率
当Marker不见时，我们不仅要问“怎么办”，更要问“为什么”——这可能是在提醒你，转膜过程存在隐藏问题。


可能性一：转膜条件对Marker“不友好”

症状：蛋白条带正常，但Marker条带全部很弱或完全没有。

01

转膜时间或电流不足

原理：预染Marker中的大分子量条带转移速度较慢。如果转膜时间或电流不足，这些大分子可能还卡在凝胶里。
解决方案：
延长转膜时间：标准湿转可延长至90-120分钟
适当提高电流：但需注意散热，避免过热
重点监控：转膜后立即染凝胶，看Marker是否残留


02

甲醇浓度过高

原理：高浓度甲醇（>20%）会使凝胶过度收缩，孔径变小，大分子Marker难以“挤”出来。
症状特点：小分子量Marker可见，大分子量Marker缺失。
解决方案：
✅ 调整甲醇浓度：PVDF膜建议10-20%，NC膜建议0-10%
✅ 大分子专用配方：检测大蛋白时，可用含0.1% SDS的低甲醇（10%）缓冲液


03

转膜缓冲液反复使用

原理：缓冲液中的离子成分会在转膜过程中消耗，pH值会变化，导致转膜效率下降。
解决方案：
每次用新鲜缓冲液：别省这点钱，真的
批量配制分装：可一次性配好1L，分装后-20℃保存


可能性二：Marker本身“不给力”

症状：无论怎么优化条件，这个批次的Marker就是表现不好。

01

预染Marker失活或降解

原因：
反复冻融导致荧光基团或染料降解
保存时间过长
保存温度不当
识别方法：
电泳后紫外灯下看凝胶，如果凝胶上都看不见Marker，那肯定是Marker问题
对比新旧批次：用新旧Marker跑同一块胶对比


02

未预染Marker的问题

如果你用的是未预染Marker：可能忘记染色步骤、染色方法不当、染色后被洗掉。


可能性三：检测方法“没找准”

症状：丽春红染色能看见Marker，但ECL显影看不见。

01

显影条件不匹配

原理：预染Marker上的染料或荧光基团，与ECL化学发光波长不匹配。
常见情况：
彩色预染Marker：某些颜色在ECL下信号很弱
荧光预染Marker：需要特定激发波长
解决方案：
确认Marker类型：阅读说明书，了解检测方法
彩色Marker：可在显影前拍照记录Marker位置

图片

快速排查流程图


预防措施：让Marker每次都“在线”

标准操作流程建议


每次转膜前：
检查Marker保存条件和有效期
确认上样量足够
配制新鲜的转膜缓冲液
转膜过程中：
确保足够的转膜时间
保持低温，避免过热
确认电流稳定
转膜后立即：
必须丽春红染色：第一时间确认Marker转移情况
拍照记录Marker位置：方便后续分析
备用方案：双重Marker策略
对于重要实验，可以考虑：
预染+未预染Marker混合上样：双重保险
在样本旁加Marker：左右两侧都加，避免单点失效


特殊情况处理

大分子量蛋白实验
当目标蛋白>100kDa时：
选择含大分子量条带的Marker
延长转膜时间至2小时
缓冲液加0.1% SDS帮助转移

小分子量蛋白实验
当目标蛋白<20kDa时：
小分子Marker可能转膜时“跑过头”
缩短转膜时间（30-45分钟）
使用0.2μm孔径膜防止穿透


从Marker到完整WB的成功

解决了Marker显示问题，我们更要认识到：WB的成功是系统性的。从Marker的准确显影，到目标蛋白的特异性检测，每个环节都需要精准把控。
当你的Marker清晰可见，为蛋白条带提供准确的分子量参照时，下一步就需要高特异性、高亲和力的抗体来精准识别目标，将生物学信息转化为可靠的科研数据。
正如优品WB抗体系列所坚持的理念：每一张完美的WB图，都源于对每个细节的极致追求。我们的产品正是为帮助您实现这一目标而精心打造：

图片

✔ 高特异性------条带清晰锐利，背景干净通透，无论您选择哪种膜，都能获得漂亮的检测结果

✔ 高稳定性------4℃保存时间长，回收使用后信号衰减缓慢，确保实验结果的重复性和可靠性

✔ 多种包装规格------提供小包装（如10μL试用装），方便您在确定最佳实验条件时避免试剂浪费

✔ 覆盖全面------从内参抗体、磷酸化抗体到稀有靶点，我们提供全面的WB抗体解决方案，满足您不同的研究需

记住，一个成功的Western Blot实验，既需要清晰的Marker作为“坐标”，也需要特异的抗体作为“探针”。两者兼备，方能将您的科学发现，清晰、准确地呈现于纸上。

掌握让Marker清晰显示的技巧，让您的WB数据从此“有尺可依”，结果更可信！祝您实验顺利，成果丰硕！