摘要

背景：当归芍药散是一种常用的中药方剂，在治疗阿尔茨海默病方面已显示出临床疗效。本研究旨在探讨DSS及其拆方（酸甘汤与辛甘汤）在治疗AD中的疗效差异，以及DSS恢复AD自噬的机制。

方法：采用网络药理学策略阐述DSS在AD中的生物活性成分、相关靶点及调控机制，包括靶点预测、PPI网络构建与分析、GO和KEGG通路富集分析。采用脑室注射Aβ1-42诱导的AD小鼠模型，评估DSS及其拆方对AD的治疗效果。采用Morris水迷宫评估认知功能。通过RT-qPCR和ELISA定量炎症细胞因子表达水平。采用Western blot检测AD病理标志物及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达。

结果：从数据库和文献中筛选出50个活性化合物和718个HUB基因。KEGG和GO分析表明，DSS抗AD的潜在机制涉及AMPK/mTOR信号通路和线粒体自噬。体内动物实验结果表明，DSS、SG和XG治疗改善了小鼠的认知功能并减轻了神经炎症，缓解了神经元细胞的病理变化，提高了PSD-95蛋白水平，降低了APP和p-Tau水平。其中，DSS效果最佳。此外，DSS、SG和XG上调了LC3、Beclin1和p-AMPK的表达，同时降低了P62和p-mTOR的表达。

结论：DSS、SG和XG可能通过AMPK/mTOR自噬信号通路，改善了Aβ1-42注射小鼠的AD相关病理症状。
关键词：阿尔茨海默病；当归芍药散；自噬；AMPK/mTOR

核心内容

本研究探讨了经典中药复方当归芍药散及其拆方（酸甘汤、辛甘汤）对阿尔茨海默病的治疗作用及机制。核心发现如下：

疗效验证：在Aβ1-42诱导的AD小鼠模型中，DSS及其拆方均能显著改善小鼠的空间学习记忆能力（Morris水迷宫测试），减轻神经炎症（降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平及小胶质细胞标记物IBA1表达），改善海马神经元病理形态，上调突触蛋白PSD-95表达，并降低AD关键病理蛋白APP和p-Tau的水平。其中，全方DSS的改善效果最为显著。

作用机制：网络药理学分析预测DSS抗AD的潜在机制与AMPK/mTOR信号通路和自噬相关。实验验证表明，DSS及其拆方能上调自噬相关蛋白LC3-II和Beclin1的表达，下调自噬底物蛋白P62的表达，同时激活AMPK（增加p-AMPK）并抑制mTOR（减少p-mTOR），表明其能够恢复由Aβ诱导的自噬抑制，这一过程可能通过调控AMPK/mTOR信号通路实现。

方剂配伍意义：研究对比了全方DSS与拆方SG、XG的效果，发现全方疗效优于各拆方，体现了中药复方多成分、多靶点协同作用的“配伍”优势与理论精髓。

研究流程

网络药理学预测：

从TCMSP数据库筛选DSS六味药材的活性成分（OB≥30%，DL≥0.18），并补充文献报道的有效成分，共得50个。

通过Swiss Target Prediction预测活性成分靶点。

从OMIM、GeneCards等疾病数据库获取AD相关靶点。

取药物靶点与疾病靶点的交集，得到299个DSS治疗AD的潜在关键靶点。

构建蛋白互作网络，筛选出核心靶点。

对关键靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析，提示AMPK/mTOR信号通路和自噬是重要通路。

分子对接显示DSS主要活性成分（如芍药苷、阿魏酸、白术内酯III等）与AMPK、mTOR蛋白具有良好的结合活性。

体内动物实验验证：

模型建立：对C57BL/6J小鼠进行双侧脑室注射聚集态Aβ1-42，建立AD模型。

分组给药：分为假手术组、模型组、DSS组、酸甘汤组、辛甘汤组、阳性药多奈哌齐组。灌胃给药28天。

行为学评估：给药后第21天开始进行Morris水迷宫测试，评估学习记忆能力。

样本采集与分析：行为学测试后处死小鼠，取脑组织。

分子生物学：RT-qPCR和ELISA检测炎症因子（IL-1β, IL-6, TNF-α）的mRNA和蛋白水平；Western blot检测PSD-95、APP、p-Tau以及自噬（LC3, P62, Beclin1）和AMPK/mTOR通路（p-AMPK, p-mTOR）相关蛋白。

组织形态学：HE染色观察海马CA1和DG区神经元形态；免疫组化检测小胶质细胞标记物IBA1的表达。

总结与展望

总结：本研究综合运用网络药理学和实验验证，证实了当归芍药散能有效改善AD模型小鼠的认知功能障碍、神经炎症和神经元损伤，其神经保护作用可能与激活AMPK/mTOR信号通路、进而恢复细胞自噬功能有关。全方DSS的疗效优于其拆方，体现了中药复方整体治疗的优势。

展望与局限：

剂量关系：本研究未探讨不同给药剂量下的量效关系，未来可进一步细化。

机制深度验证：目前的研究结果主要为相关性证据，未来需要利用基因敲除、特异性抑制剂等反向验证手段，更直接地证实AMPK/mTOR自噬通路在DSS神经保护作用中的核心地位。

评估指标：对神经元和突触恢复的评估指标（如PSD-95）较为有限，未来应纳入更多元的突触前/后蛋白、电生理等指标进行全面评估。

模型拓展：本研究仅使用了Aβ脑室注射模型。为了增强结论的普适性，未来应在APP/PS1等转基因AD模型中进行验证。

成分与靶点：虽然网络分析筛选了成分和靶点，但具体是哪些成分通过哪些关键靶点驱动了核心通路，仍需进一步的细胞和分子实验深入解析。

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文章标题

Danggui Shaoyao San and disassembled prescription: neuroprotective effects via AMPK/mTOR-mediated autophagy in mice

作者：

Xiaoqing Cheng, Yuqiong Dai, Baoling Shang, Shuting Zhang, Liting Lin, Qingguang Wu, Ruoting Zhan, Shengqing Li, Sijun Liu

DOI：

10.1186/s12906-024-04588-x；

发表期刊：

BMC Complementary Medicine and Therapies

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2.SYP-M0031Mouse IL-6 ELISA kit

3.SYP-M0036Mouse TNF-α ELISA kit