发布时间：2025-12-17
你的凝胶是不是也喜欢“搞艺术创作”？
跑过WB的人都知道，理想中的电泳结果应该是：笔直整齐的marker条带，清晰锐利的样本条带，背景干净如画布。
但现实往往是：条带歪了、笑了、拖尾了，甚至直接“消失”了。每次打开凝胶观察窗，都像开盲盒——这次又会遇到什么“惊喜”？
今天，我们就来集中解答WB电泳中那些让人头疼的五大“怪现象”，让你的凝胶从此规规矩矩！
看起来像：条带两端向上弯曲，形成一个笑脸形状
主要原因：
电泳产热不均：凝胶中间温度高于两侧
凝胶厚度不均：灌胶时底部有气泡或不平整
缓冲液浓度不均：电泳液配制或补充不当
解决方案：
1. 降低电泳电压，减少产热
2. 确保灌胶均匀，避免气泡
3. 使用新鲜配制的电泳缓冲液
4. 夏季可在冷室进行电泳
看起来像：条带两端向下弯曲，形成皱眉形状
主要原因：
凝胶底部温度过低：与“微笑”正好相反
凝胶聚合不均：底部聚合不完全
样品盐分过高：影响电泳迁移
解决方案：
1. 确保凝胶充分聚合（至少1小时）
2. 检查样品缓冲液是否合适
3. 适当提高电泳电压
看起来像：条带拖着长长的尾巴
主要原因：
蛋白过载：上样量太大
蛋白降解：样本处理不当或保存时间过长
溶解不充分：蛋白聚集未完全溶解
解决方案：
1. 减少上样量（通常20-50μg总蛋白足够）
2. 新鲜制备样本，避免反复冻融
3. 确保样本充分煮沸变性
4. 增加样本缓冲液中SDS浓度
看起来像：条带边界模糊，宽度异常
主要原因：
电泳时间过长：蛋白跑出最佳分离区
凝胶浓度不合适：孔径与蛋白大小不匹配
电压过低：分离时间过长
解决方案：
1. 根据蛋白大小优化凝胶浓度
2. 控制电泳时间，及时停止
3. 使用合适的电压（通常80-120V）
看起来像：凝胶上出现垂直的条纹
主要原因：
样品制备问题：存在不溶性颗粒
加样孔残留：上次胶的残留物
梳子拔出不当：损坏加样孔
解决方案：
1. 离心去除样本中不溶性物质
2. 仔细清洗梳子和玻璃板
3. 轻柔拔出梳子，避免损伤
看起来像：某些预期条带完全看不见
主要原因：
蛋白浓度过低：低于检测限
电泳条件不当：蛋白未进入分离胶
转膜失败：蛋白未转移到膜上
抗体问题：一抗或二抗失效
解决方案：
1. 浓缩样本或增加上样量
2. 检查电泳缓冲液和电压
3. 验证转膜效率（可用丽春红染色）
4. 确认抗体活性和特异性
看起来像：条带出现在预期分子量的上下位置
主要原因：
蛋白修饰：磷酸化、糖基化等改变迁移率
剪切变体：存在不同大小的异构体
二聚体/多聚体：未充分还原
marker不准：预染marker可能不准
解决方案：
1. 检查蛋白是否有已知修饰
2. 确保充分还原（使用新鲜DTT或β-巯基乙醇）
3. 验证marker准确性
4. 通过WB验证蛋白身份
第一步：样品检查
蛋白浓度测定是否准确？
样本是否新鲜制备？
还原剂是否新鲜有效？
第二步：凝胶检查
凝胶是否充分聚合？
浓度是否适合目标蛋白？
加样孔是否完整？
第三步：电泳条件检查
缓冲液是否新鲜配制？
电压设置是否合适？
电泳时间是否恰当？
第四步：对照设置
阳性对照是否正常？
marker条带是否清晰？
内参蛋白表现如何？
凝胶制备标准化
1. 使用固定配方和品牌试剂
2. 记录每次配胶的详细参数
3. 建立质量检查标准
电泳条件优化
1. 针对不同蛋白大小建立标准程序
2. 记录电压、时间、温度等参数
3. 定期校准电泳设备
样品处理规范化
1. 制定标准样品制备流程
2. 建立样品质量控制标准
3. 培训所有操作人员
解决了电泳问题，只是Western Blot成功的一半。电泳后的转膜、封闭、抗体孵育等环节同样重要，每个步骤都可能影响最终结果。
正如优品WB抗体系列所坚持的理念：可靠的实验结果需要每个环节的完美配合。我们的产品专为追求精准数据的科研工作者设计：
✔ 高特异性——条带清晰锐利，背景干净通透，有效避免非特异性结合造成的假阳性
✔ 高稳定性——4℃保存时间长，回收使用后信号衰减缓慢，确保实验结果的重复性和可比性
✔ 多种包装规格——提供小包装（如10μL试用装），方便条件摸索和预实验，避免珍贵试剂的浪费
✔ 覆盖全面——从常规内参到磷酸化抗体，从常见靶点到稀有蛋白，提供一站式的WB抗体解决方案
记住，一次完美的WB实验，从优质的电泳开始，到可靠的抗体检测结束。每个环节都值得精心对待。
掌握电泳问题解决技巧，让您的WB实验从起点就一帆风顺！欢迎关注我们，获取更多WB实验的实用技巧与专业解决方案。
