发布时间：2025-11-25
你的凝胶，为什么会想不开？
精心配好SDS-PAGE胶，满心期待地转身去准备样本。再回头时，却看到了令人心碎的一幕——凝胶与玻璃板之间出现了一道无情的缝隙，或者浓缩胶诡异地“萎缩”了。
这种被称为“凝胶收缩”的现象，虽然不会让实验完全失败，却可能导致条带扭曲、微笑效应，甚至让珍贵的样本白白浪费。
今天，我们就来揪出这个让凝胶“想不开”的元凶，让你的胶板从此服服帖帖。
要解决问题，首先要明白凝胶聚合的化学原理。SDS-PAGE凝胶的成型，是靠丙烯酰胺（Acr） 和甲叉双丙烯酰胺（Bis） 在过硫酸铵（APS） 和TEMED作用下发生的自由基聚合反应。
这个过程中，聚合物链交联形成三维网络结构。如果这个过程出现问题，凝胶就会“想不开”——开始收缩。
聚合是放热反应
丙烯酰胺聚合过程会释放热量。如果环境温度过高：
l聚合反应过快，导致凝胶内部应力不均
l剧烈的热胀冷缩导致凝胶与玻璃板分离
l尤其夏季实验室空调不足时常见
最佳温度范围：20-25°C
危险温度：超过28°C风险显著增加
解决方案：
l夏季预冷试剂和玻璃板
l在空调房间内灌胶
l避免在高温设备旁操作
丙烯酰胺浓度越高，越容易收缩
l8%分离胶：相对安全
l12%分离胶：开始出现风险
l15%分离胶：高风险区域
交联剂比例是关键
甲叉双丙烯酰胺（Bis）的比例直接影响凝胶的机械性能：
l推荐比例：Acr:Bis = 29:1 或 37.5:1
l比例过高：凝胶变脆，容易开裂
l比例过低：凝胶太软，容易变形
自己配胶的常见错误：
l称量误差，特别是Bis的称量
l使用沉淀的Acr/Bis储存液
l配方计算错误
过硫酸铵（APS）——最容易被忽视的元凶
lAPS是聚合反应的引发剂，但它极其不稳定：
l4℃保存有效期：1-2周
l-20℃保存有效期：1-2个月
l 室温下几天就会失效
判断APS是否失效：
l配制10% APS溶液应为无色透明
l如果变黄或配制时不起泡，说明已失效
l最好新鲜配制，或小包装分装冻存
TEMED的重要性
TEMED是催化剂，促进自由基形成：
l 易挥发，需密封保存
l 开封后有效期缩短
l 用量需精确，过多过少都影响聚合
灌胶技巧
l 速度要快：从加入TEMED到灌胶最好在3分钟内完成
l 液面要平：分离胶液面保持水平，避免厚薄不均
l 封胶要匀：用水或异丙醇封胶时，要轻柔沿壁加入
常见的操作失误：
l 灌胶后剧烈移动操作台
l 封胶液冲击力太大
l 等待聚合时受到振动
聚合时间控制
分离胶：室温30-45分钟
浓缩胶：室温20-30分钟
时间不足：凝胶聚合不完全
时间过长：可能导致过度收缩
清洁度影响粘附
l 残留的凝胶会影响新胶的附着
l 洗涤剂残留可能抑制聚合
l 水渍或指纹影响贴合
正确的清洗步骤：
1. 立即冲洗使用后的玻璃板
2. 用温和洗涤剂清洗
3. 充分冲洗去除所有洗涤剂
4. 蒸馏水冲洗后晾干或擦干
5. 避免用硬物刮擦玻璃板表面
组装技巧
l 确保玻璃板底部对齐
l 夹子力度均匀，避免局部应力
l 灌胶前做漏水测试
高浓度胶的应对策略
当配制>12%的分离胶时：
l 适当降低APS和TEMED的浓度
l 延长聚合时间，让反应温和进行
l 考虑使用低收缩的配方
快速配胶的妥协
如果需要快速得到结果：
l 可适当增加APS/TEMED用量
l 但需接受收缩风险增加的事实
l 最好还是预留充足时间
冬季配胶的挑战
温度过低时：
l 聚合反应过慢或不发生
l 可预热试剂至室温
l 在温暖环境中操作
建立标准化操作程序
试剂准备：
l 使用新鲜的APS溶液
l 准确计算各组分用量
l 提前准备好所有器材
操作流程：
l 严格按照顺序加入试剂
l 控制好混合和灌胶时间
l 创造稳定的聚合环境
质量控制：
l 记录每次配胶的细节
l 标记试剂的配制日期
l 定期检查设备状态
troubleshooting指南
当出现收缩问题时，按照以下顺序排查：
1. 检查APS是否新鲜
2. 确认环境温度是否合适
3. 复核配方计算是否正确
4. 检查操作手法是否规范
5. 考虑玻璃板是否需要更换
解决了凝胶收缩问题，只是WB成功的第一步。接下来还有电泳、转膜、封闭、抗体孵育等一系列挑战。
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