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科研 猪乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒

货号: YPY33461
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产品介绍

反应种属
检测范围
400 ng/mL
灵敏度
1ng/mL
物理性能
各液体组分澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。
用途
用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中猪乳酸脱氢酶(LDH)的浓度。
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被猪乳酸脱氢酶 (LDH)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、再加入生物素标记抗体,经过温育 与充分洗涤后,再加入HRP偶联的亲和素,经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔 板固相表面形成固相抗体-抗原-生物素标记抗体-亲和素酶的夹心复合物。用底物TMB显色, TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样 品中的猪乳酸脱氢酶(LDH)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值), 计算样品浓度.
特异性
重复性
本试剂盒识别天然和重组猪乳酸脱氢酶(LDH),与结构类似物无交叉。
回收率
回收率在85%-115%之间。
试验所需自备试验器材
操作程序
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。 1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。 2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。 3、设置标准品孔、0值孔、空白孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,0值 孔加样本稀释液50μL,空白孔不加,样本孔加待测样本50μL。 4、除空白孔外,标准品孔、0值孔和样本孔,加入生物素化抗体50μL。5、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光孵育30min。 6、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20S,甩去洗涤液,吸水 纸上拍干,如此重复5次。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡30s 的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应 板。 7、除空白孔外,每孔加入HRP标记亲和素50μL。 8、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光孵育30min。 9、重复步骤6。 10、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反 应板,37℃水浴锅或恒温箱避光孵育15min。 11、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪450nm波长上读取各孔吸光度(OD)。
注意事项
1)本试剂盒仅供体外研究使用,不用于临床诊断。 2)试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时,请 按国家生物试验室安全防护条例执行。 3)严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 4)洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要 让微孔干燥掉。5)消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值。 6)底物显色液应呈无色或很浅的颜色。 7)避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 8)在储存和温育时避免强光直接照射。 9)平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 10)任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂 盒中反应试剂的生物活性。 11)检测使用的酶标仪需要安装能检测 450±10nm 波长的滤光片,光密度范围在 0-3.5 之间。建议使用时提前 15 分钟预热。 12)请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。 13)试验中所用的 EP 管和吸头均为一次性使用,严禁混用。 14)请勿使用过期的试剂。
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