实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预 先包被去甲氧基肾上腺素(NMN)抗体的包被微孔中,依次加入标 本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB 显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化 成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的去甲氧基肾上腺素(NMN) 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样 品浓度。
操作程序
1. 从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封 袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50 μL; 3. 样本孔先加待测样本10 μL,再加样本稀释液40 μL;空白孔不 加。 4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶 (HRP)标记的检测抗体100 μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴 锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1 min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5 次(也可用洗板机洗板)。 6. 每孔加入底物A、B 各50 μL,37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入终止液50 μL,15min 内,在450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
其他名称
犬(Canine)去甲氧基肾上腺素(NMN)试剂盒