摘要

背景：过度炎症是糖尿病创面的突出问题，可导致愈合延迟甚至截肢。Corligain（Cori）是一种天然多酚化合物，具有多种药理活性，尤其以抗炎特性著称。本研究旨在评估Cori对糖尿病创面的抗炎作用，并探索其潜在机制。

方法：通过形态学观察、组织学染色和基因表达分析，在链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠中评估了Cori对创面愈合的影响。采用流式细胞术、qRT-PCR、蛋白质印迹分析和RNA测序，在RAW264.7细胞中阐明其潜在机制。

结果：结果表明，Cori可加速糖尿病小鼠创面愈合、抑制过度炎症并调节巨噬细胞极化。体外实验中，Cori减少了RAW264.7细胞的M1极化并抑制了促炎介质的表达。测序分析显示，Cori通过多种靶向机制对RAW264.7细胞发挥抗炎作用。

结论：此外，在LPS诱导的巨噬细胞中，Cori显著降低了TLR4、MyD88和NF-κB的激活。同时，Cori通过促进脂肪酸氧化增强M2极化。总之，研究结果表明，Cori通过多种靶向机制调节巨噬细胞极化，有效抑制炎症并加速糖尿病创面愈合。

关键词： Corligain，糖尿病创面，炎症，巨噬细胞极化，多酚

核心内容：

糖尿病创面愈合延迟是糖尿病严重的并发症，给全球带来巨大的社会经济和医疗负担。正常创面愈合包括止血、炎症、增殖和重塑四个阶段。然而，糖尿病创面的高糖环境和血管并发症常导致缺氧、氧化应激、细菌繁殖和炎症反应过度，使创面停滞在持续过度炎症状态。巨噬细胞是炎症中的主要效应细胞，其中M1型为促炎表型，主要在炎症期活跃；M2型为促修复表型，有助于消退炎症并促进增殖期进展。糖尿病创面中M1型巨噬细胞持续大量存在，阻碍其向修复表型极化，导致炎症持续而无法愈合。因此，调节巨噬细胞表型是治疗糖尿病创面的关键策略。

核心机制流程

实验材料： Corligain（纯度≥98%）、依托莫昔尔（Etomoxir）、链脲佐菌素（STZ）、LPS、重组小鼠IL-4、IFN-γ等。

动物模型： 7-8周龄雄性BALB/c小鼠，腹腔注射STZ（30 mg/kg，连续5天）诱导糖尿病模型。空腹血糖>16.7 mmol/L视为造模成功。于背部制作6 mm全层皮肤缺损创面，周围缝合硅胶环限制收缩。创面周围皮内注射Cori（50 μg/mL，100 μL/天）或生理盐水，连续14天。

细胞实验： RAW264.7巨噬细胞系，用LPS+IFN-γ诱导M1极化，用IL-4诱导M2极化，Cori预处理2小时。

检测方法： 包括创面拍照面积分析、H&E和Masson染色、免疫组化/免疫荧光染色、流式细胞术、qRT-PCR、Western blot、NO测定及RNA测序。

Cori局部应用促进糖尿病小鼠创面愈合

与正常对照组相比，糖尿病组小鼠创面愈合明显延迟。Cori治疗组在第1、3、7、14天创面面积均显著小于糖尿病组。H&E染色显示，第7天Cori治疗组肉芽组织形成明显增多；第14天，Cori组和正常对照组创面均可见成熟肉芽组织、胶原纤维和新生毛囊，而糖尿病组仍为疏松肉芽组织并伴有大量炎性细胞浸润。Masson染色显示Cori治疗增强了胶原沉积，纤维排列密集有序。PCNA免疫组化表明，Cori恢复了糖尿病组降低的细胞增殖率。

Cori减轻创面组织炎症

糖尿病组创面中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6、CCL-2、Cox-2和iNOS的mRNA水平显著高于正常组，Cori治疗显著降低这些基因的表达。免疫组化染色也证实Cori组iNOS和TNF-α蛋白表达明显减少。

 Cori调节巨噬细胞表型

免疫荧光染色显示，第7天正常组和糖尿病组创面均有大量F4/80+CD86+（M1型）巨噬细胞浸润；Cori治疗减少了F4/80和CD86表达，增加了CD206阳性细胞比例。第14天，糖尿病组仍以M1为主，而Cori组M2型巨噬细胞比例显著增加，CD206+/CD86+比值升高，表明Cori促进了M1向M2的转变。

讨论与结论

本研究证明Cori通过双重机制促进糖尿病创面愈合：一方面通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制M1型巨噬细胞极化，减轻炎症；另一方面通过增强脂肪酸氧化促进M2型巨噬细胞极化，发挥抗炎和促修复作用。Cori作为天然多酚化合物，具有多靶点抗炎活性，安全性良好，有望成为糖尿病创面治疗的新型候选药物。

局限性： 细胞系与体内巨噬细胞存在差异，未来需建立原代巨噬细胞和三维培养体系，并利用基因敲除小鼠模型进一步验证具体靶点。

未来研究

1. 靶点验证与机制深化

采用巨噬细胞特异性基因敲除小鼠（如TLR4^flox/flox-Lyz2-Cre、MyD88^flox/flox-Lyz2-Cre），明确Cori作用的核心靶点

利用SPR、CETSA等技术验证Cori与TLR4/MyD88蛋白的直接结合位点及结合力

2. 模型优化与转化衔接

建立原代骨髓来源巨噬细胞（BMDM）及皮肤组织三维培养模型，更真实模拟创面微环境

采用db/db自发性糖尿病小鼠或高脂饮食联合STZ诱导的2型糖尿病模型，提高临床相关性

3. 代谢调控深度解析

运用代谢组学和Seahorse细胞能量代谢分析，系统阐明Cori对巨噬细胞脂肪酸氧化及其他代谢通路的调控网络

探索Cori是否通过AMPK/PGC-1α等上游信号调控FAO关键酶表达

4. 给药方式与剂型优化

开发负载Cori的水凝胶、纳米粒或微针贴片等新型递送系统，实现创面局部缓释，提高生物利用度

比较不同给药途径（皮内注射、外用敷料、系统性给药）的疗效差异

5. 临床转化验证

开展小样本临床观察试验，评估Cori在糖尿病足溃疡患者中的安全性、耐受性及初步疗效

筛选预测疗效的生物标志物（如创面M1/M2比值、TLR4表达水平），指导精准用药

6. 多组学联合分析

结合单细胞RNA测序（scRNA-seq）和空间转录组学，在单细胞水平解析Cori对创面免疫微环境中各类细胞的差异化调控作用

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IF 4.4

文章标题

Corilagin enhances wound healing by modulating the macrophage phenotype in diabetic mice

作者：

Yun Li, Site Yu, Jizhang Zeng, Situo Zhou, Xu Cui, Jie Zhou, Pihong Zhang

DOI：

10.1096/fj.202403085RR

发表期刊：

FASEB JOURNAL

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