摘要

目的： 三阴性乳腺癌是一种高度侵袭性的乳腺癌亚型，血管生成在其进展中起关键作用。目前临床使用的抗血管生成药物主要靶向VEGF/VEGFR通路，但存在高血压等副作用及耐药性问题。因此，开发新型抗血管生成靶点具有重要意义。

方法： 本研究使用人脐静脉血管内皮细胞、大鼠主动脉环、鸡胚绒毛尿囊膜和卵黄囊膜模型以及三阴性乳腺癌异种移植模型（小鼠和鸡胚），评估新型EPAC抑制剂NY0123的抗血管生成活性。通过Western blot、qRT-PCR和免疫组化等方法探讨其分子机制。

结果： NY0123在体外显著抑制内皮细胞的迁移和管形成，在体内抑制鸡胚模型和肿瘤模型中的血管生成，并有效抑制三阴性乳腺癌肿瘤生长。其效果优于已知EPAC抑制剂ESI-09。机制研究表明，NY0123通过抑制EPAC1，下调VEGFR2表达及PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路，同时激活Notch信号通路。

结论： NY0123是一种新型、高效的EPAC抑制剂，通过调控血管生成信号网络发挥抗血管生成和抗肿瘤活性，有望成为三阴性乳腺癌治疗的候选药物。

关键词： EPAC1，血管生成，三阴性乳腺癌，NY0123，Notch信号

核心内容：

三阴性乳腺癌因缺乏雌激素受体、孕激素受体和HER2表达，治疗选择有限，预后较差。由于其高度血管化的特性，肿瘤血管密度成为早期乳腺癌的不良预后因素。目前FDA批准的多种抗血管生成药物（如贝伐珠单抗、索拉非尼等）主要靶向VEGF/VEGFR通路，但存在高血压和耐药等问题。因此，寻找能够同时抑制VEGF和非VEGF通路的新靶点成为研究热点。

EPAC（cAMP直接激活的交换蛋白）是近年来发现的cAMP非依赖性信号分子。EPAC1在血管内皮细胞中高表达，调控细胞迁移、黏附、屏障功能和血管生成。研究表明，EPAC1参与肿瘤细胞诱导的血管生成，是抗血管生成治疗的潜在新靶点。

研究流程示例

1. 体外实验

细胞模型：人脐静脉血管内皮细胞。

EPAC1敲低：使用siRNA技术。

细胞活力检测：CCK-8法。

细胞迁移实验：Transwell小室法。

管形成实验：Matrigel胶上培养。

大鼠主动脉环实验：评估微血管出芽。

2. 体内血管生成模型

鸡胚CAM模型：观察药物对血管网络的影响。

鸡胚YSM模型：评估早期血管生成。

小鼠Matrigel plug模型：皮下注射含FGF-2和药物的Matrigel，检测新生血管。

3. 抗肿瘤模型

鸡胚CAM肿瘤模型：接种MDA-MB-231细胞，评估NY0123对肿瘤生长和血管生成的影响。

小鼠皮下移植瘤模型：接种4T1细胞，腹腔注射给药，检测肿瘤体积、重量、CD31和Ki67表达。

4. 分子机制研究

Western blot：检测VEGFR2、p-VEGFR2、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、DLL4、HEY1等蛋白表达。

qRT-PCR：检测VEGFR2 mRNA水平。

免疫组化/免疫荧光：检测CD31、CAV-1、Ki67等。

讨论与总结要点：

本研究首次系统评估了新型EPAC抑制剂NY0123在三阴性乳腺癌中的抗血管生成和抗肿瘤活性。与传统抗VEGF药物不同，NY0123通过同时抑制VEGFR2、PI3K/AKT、MEK/ERK通路并激活Notch信号，发挥多靶点调控作用，具有克服现有抗血管生成药物耐药的潜力。此外，NY0123在体内未观察到明显器官毒性，安全性良好。

结论： NY0123是一种高效、安全的EPAC抑制剂，通过调控血管生成相关信号网络，显著抑制三阴性乳腺癌的血管生成和肿瘤生长，具有重要的临床转化前景。靶向EPAC1为三阴性乳腺癌治疗提供了新策略。

未来研究

1、药物优化与衍生物开发

对NY0123进行结构优化，提高其对EPAC1的选择性和口服生物利用度。

开发更多新型EPAC1抑制剂，扩大结构多样性。

2、联治疗策略

评估NY0123与化疗药物（如紫杉醇、顺铂）或免疫检查点抑制剂的协同抗肿瘤效果。

探索与抗VEGF药物联用，克服现有抗血管生成治疗的耐药问题。

3、适应症拓展

验证NY0123在其他实体瘤（如肺癌、结直肠癌、胶质瘤）中的抗血管生成和抗肿瘤活性。

探索其在非肿瘤血管相关疾病（如糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性）中的应用潜力。

4、机制深入研究

明确EPAC1调控Notch信号通路的分子细节。

探索EPAC1在肿瘤微环境其他细胞（如成纤维细胞、免疫细胞）中的功能。

5、临床前毒理与药代动力学

开展NY0123的长期毒理学研究和药代动力学评估，为临床试验奠定基础。

优化给药途径（如口服、静脉注射）和给药方案。

6、生物标志物开发

筛选预测NY0123疗效的生物标志物（如EPAC1表达水平、VEGFR2突变状态），推动精准治疗。

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IF 4.2

文章标题

EPAC inhibitor suppresses angiogenesis and tumor growth of triple-negative breast cancer

作者：

Zishuo Li, Qiao Liu, Yuhao Cai, Na Ye, Zinan He, Yuying Yao, Yi Ding, Pingyuan Wang, Cuiling Qi, Lingyun Zheng, Lijing Wang, Jia Zhou, Qian-Qian Zhang

DOI：

10.1016/j.bbadis.2024.167114

发表期刊：

BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR BASIS OF DISEASE

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