发布时间：2025-10-29
肝癌免疫治疗响应率低、易耐药是当前临床面临的重大挑战。氧化苦参碱作为一种天然生物碱，已被证实具有抗肿瘤活性，但其在肝癌免疫调节与细胞死亡调控中的具体机制尚不明确。本研究旨在探讨氧化苦参碱是否通过调控干扰素-γ（IFN-γ）影响程序性死亡配体1（PD-L1）表达及铁死亡过程，并评估其与抗PD-L1抗体联合使用的协同抗肿瘤效果。研究通过体内外实验发现，氧化苦参碱能显著下调IFN-γ表达，逆转其诱导的PD-L1上调和铁死亡抑制，进而促进CD4⁺/CD8⁺ T细胞浸润，增强抗PD-L1疗效。机制上，氧化苦参碱通过抑制IFN-γ–PD-L1–GPX4/xCT信号轴，促进Fe²⁺积累、ROS生成及脂质过氧化产物MDA升高，诱导铁死亡。本研究首次揭示了氧化苦参碱在肝癌中通过代谢-免疫交叉调控增强免疫治疗效果的机制，为肝癌联合治疗提供了新思路。
关键词：氧化苦参碱、PD-L1、IFN-γ、铁死亡、肝癌免疫治疗
氧化苦参碱与抗PD-L1的协同抗肿瘤作用
在肝癌异种移植模型中，氧化苦参碱与抗PD-L1联合治疗显著抑制肿瘤生长，效果优于单药治疗。
联合治疗组小鼠外周血中IFN-γ水平显著下降，肿瘤组织中CD4⁺和CD8⁺ T细胞浸润明显增加。
图1氧马特林对荷瘤小鼠的抑制作用。
氧化苦参碱逆转IFN-γ诱导的PD-L1上调
IFN-γ可显著上调肝癌细胞中PD-L1表达，氧化苦参碱能有效逆转该效应，并在mRNA水平下调CD274基因表达。
图2 IFN-γ对肝癌细胞系中PD-L1蛋白表达的影响。
氧化苦参碱促进铁死亡
IFN-γ上调铁死亡抑制蛋白xCT和GPX4，抑制Fe²⁺、ROS和MDA生成。
氧化苦盐碱逆转IFN-γ对铁死亡的抑制作用，显著提升细胞内Fe²⁺、ROS和MDA水平。
图3 IFN-γ对肝癌细胞系铁死亡相关蛋白表达的影响。
机制通路：IFN-γ–PD-L1–GPX4/xCT轴
氧化苦参碱通过下调IFN-γ，抑制PD-L1及其下游铁死亡相关蛋白xCT与GPX4，恢复T细胞功能并诱导铁死亡。
图5氧马特林干预IFN-γ在HEPG2细胞铁死亡中的作用。
总结与转化价值
氧化苦参碱作为一种低毒天然药物，可增强抗PD-L1疗效，具有临床转化潜力。
研究提出了“免疫检查点–铁死亡”协同调控的新策略，为肝癌免疫联合治疗提供理论依据。
模型构建
使用H22细胞构建BALB/c小鼠肝癌异种移植模型。
体外采用HEPG2、MHCC97H和H22细胞系，使用IFN-γ诱导PD-L1高表达模型。
分组与处理
体内分组：对照组、氧化苦参碱组、抗PD-L1组、联合治疗组。
体外处理：IFN-γ（10 ng/mL）与氧化苦参碱（1–4 mg/mL）单独或联合干预。
表型与机制分析
肿瘤体积、重量、H&E染色评估组织病理变化。
ELISA检测外周血IFN-γ水平；免疫组化检测CD4⁺/CD8⁺ T细胞浸润。
Western blot、免疫荧光、qRT-PCR检测PD-L1、xCT、GPX4蛋白及mRNA表达。
使用FerroOrange、DCFH-DA、MDA试剂盒检测Fe²⁺、ROS和脂质过氧化水平。
统计学方法
使用GraphPad Prism 9进行t检验与ANOVA分析，*P < 0.05为显著差异。
本研究系统阐明了氧化苦参碱在肝癌中通过下调IFN-γ，抑制PD-L1表达并促进铁死亡的双重作用机制。其在体内外均表现出与抗PD-L1治疗的显著协同效应，不仅增强T细胞浸润，还逆转肿瘤细胞对铁死亡的抵抗。该研究为克服肝癌免疫治疗耐药提供了新的代谢-免疫交叉调控视角，提示氧化苦参碱可作为潜在的免疫辅助药物进一步开发。未来研究可聚焦于氧化苦参碱的临床前毒理学与药代动力学评估，推动其向临床转化。
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