发布时间：2025-10-16
省时省样品的诱惑背后，藏着这些你需要知道的秘密
“哎呀，蛋白样品又不够了！”
“时间紧迫，能不能一次跑胶把两个因子都测了？”
相信每个做Western Blot的小伙伴都曾动过这样的念头——用同一份蛋白样品同时检测两种目标蛋白。毕竟，这样既能节省珍贵的样品，又能提高实验效率，听起来简直完美！
但这个想法到底可行吗？今天，我们就来彻底聊聊这个话题。
省样品：特别是那些来之不易的样本，比如珍贵的临床标本、难转染的细胞、实验动物组织，每一微克都值得珍惜。
省时间：同时检测免去了重复跑胶、转膜的过程，确实能提升实验效率。
保证一致性：使用同一样品、同一张膜进行检测，可以消除技术误差，让结果对比更有说服力。
理论上，同时检测两种因子是完全可行的，但实际操作中却有几个必须跨越的“坎”：
两种目标蛋白的分子量必须相差足够大，通常建议至少相差10kD以上。
为什么呢？想象一下，如果两个蛋白的分子量都是50kD左右，那么它们在同一张膜上的位置就会重叠或非常接近。一抗二抗识别的时候，就会“傻傻分不清楚”，结果就是条带重叠，无法判断。
成功案例：比如检测GAPDH（36kD）和β-actin（42kD）——等等，这个组合其实不太合适，因为它们大小太接近了！这就是为什么我们经常看到文献中使用GAPDH（36kD）和Histone H3（17kD）这样的组合。
如果两个一抗来源于不同种属，比如一个兔源，一个鼠源，那么实验就相对简单。你可以使用相应的种属特异性二抗（如抗兔和抗鼠）分别进行检测。
但如果两个一抗都来源于同一种属，问题就复杂了。这种情况下，你需要进行抗体剥离和再孵育操作，这个过程可能会损伤膜上的蛋白，影响后续检测效果。
如果两个目标蛋白的表达量差异巨大——比如一个高丰度，一个低丰度——那么同时检测时，高丰度蛋白的强信号可能会掩盖低丰度蛋白的弱信号。
这是最理想的情况，前提是两个一抗来源于不同种属。
操作流程：
完成常规WB流程至一抗孵育步骤
配制一抗混合液：将两种不同种属来源的一抗按比例混合
孵育后洗涤
配制二抗混合液：将对应的两种二抗（如抗兔和抗鼠）按比例混合
孵育二抗混合液
显影检测
优点：一次完成，省时省力
缺点：对抗体匹配度要求高
这种情况更为常见，也需要更多的技巧。
操作流程：
完成第一个目标蛋白的检测（一抗、二抗、显影）
抗体剥离：使用 stripping buffer 处理膜，去除已结合的一抗二抗
封闭：重新用封闭液封闭
进行第二个目标蛋白的检测（一抗、二抗、显影）
关键步骤——抗体剥离：这一步至关重要，如果剥离不彻底，第一次的抗体信号会干扰第二次检测，造成背景过高或假阳性；如果剥离过度，又可能把目标蛋白也从膜上洗掉。
优先选择分子量差异大的蛋白组合，这是成功的基础
合理安排检测顺序：先检测弱信号或难检测的蛋白，因为第一次检测时膜的状态最好
验证剥离效果：在第二次一抗孵育前，先用ECL液孵育一下膜，看看是否还有残留信号
考虑使用内参蛋白：如果你的两个目标蛋白中有一个是内参蛋白，建议不要同时检测，因为内参需要保证线性范围内的准确检测
做好预实验：在正式实验前，先用小样试试水，优化条件
两种蛋白分子量过于接近
样品量充足，时间充裕
对定量准确性要求极高
其中一个蛋白信号极弱，需要长时间曝光
说到Western Blot检测，选择优秀的抗体和试剂至关重要。优品生物WB系列产品正是为应对复杂检测需求而生：
1. 超高特异性
条带干净漂亮，非特异性结合少，再也不用对着杂带发愁了。特别是在同时检测多个指标时，高特异性的抗体可以有效避免交叉反应，让结果清晰可靠。
2. 批次稳定性极佳
不同批次实验结果高度一致，重复实验不再看运气。这对于需要多次验证的实验来说至关重要，确保了实验结果的可比性。
3. 多种验证数据
不仅有WB验证，还有IHC、IF等多重验证，买着放心。我们的每种抗体都经过严格的质量控制，并提供详细的验证数据和应用建议。
4. 性价比超高
相比进口大牌，价格亲民但性能不打折。让您在有限的科研经费下，也能用上高品质的检测试剂。
5. 贴心售后服务
技术问题随时咨询，实验遇到困难还能获得专业指导。我们的技术团队都有丰富的实战经验，能够为您提供个性化的实验方案优化建议。
无论是简单的单指标检测，还是复杂的多指标同时检测，优品生物WB都能为您提供可靠的技术支持。我们深知科研工作的艰辛，愿以稳定优质的产品，成为您科研路上的得力助手！
回到最初的问题：同一蛋白样品能同时进行两种因子的WB检测吗？
答案是：可以，但有条件。
成功的多重检测需要周密的实验设计、合适的抗体选择和精细的操作技术。当你掌握了这些技巧，就能在保证数据质量的前提下，大大提高实验效率。
下次当样品不足或时间紧迫时，不妨尝试一下同时检测的方法，也许它会成为你的得力武器！
