发布时间：2025-06-25
Western Blot（WB）实验中，配胶是最基础但也最容易出问题的环节之一。
一个完美的凝胶直接影响后续电泳和转膜效果，但很多人在配胶时都会遇到各种“翻车”情况。
今天，我们就来盘点WB配胶5大常见问题，并提供详细解决方案，助你轻松避开这些坑！
1、配胶注意事项
试剂检查：需留意配胶试剂的有效期和清澈度，一旦发现沉淀或结晶，要及时更换。
试剂保存：
pH8.8Tris-HCl和pH6.8Tris-HCl可能会产生沉淀，根据需要选择1.0M或1.5M的浓度；
在低温下（4度以下）存放的10%SDS易结晶；
30%丙烯酰胺需在避光的情况下存放在4度以下；
APS具有活性，室温下容易失效，建议配制后分装并冷冻保存在-20度的冰箱中；
TEMED有刺鼻的气味和挥发性，对神经有毒，使用时请在通风良好的环境下，并避免暴露在空气中；
插梳技巧：插梳子时，可斜着插，以避免有气泡的产生。
胶条保护：注意防止胶条老化和干燥，电泳结束后将胶条放置在实验台上晾干。若胶条老化、出现裂纹，可以在上面放置保鲜膜进行保护。
保存方法：胶最好现配现用，如果需要保存，最好用湿润的保鲜膜包好并置于4℃冰箱中。
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常见问题分析
1、漏胶
原因：玻璃板没对齐或玻璃板底部缺损，厚玻璃板边条密闭性不良，塑料夹子太松。
解决办法：确保玻璃板干燥。正确的操作技巧是：一手用食指指腹按压厚玻璃板的一侧上缘，同时用拇指指腹按压薄玻璃板同侧的上缘，
然后同时向下按压这两个指头，另一只手则锁定同侧的锁扣，然后重复相同的步骤锁定另一侧。
2、胶未凝固
原因：APS失效或TEMED失效或者胶在未完全凝固时被移动。
解决办法：确认试剂的有效性和配比是否正确，并确保混合均匀。如果配比正确但胶仍未凝固，可以考虑增加凝固剂的用量或延长凝固时间。
3、胶中存在气泡
分为两种情况：
胶底部出现气泡：原因可能是由于胶垫材质或梳子插入不当所致，可考虑改用实心软胶垫或添加保鲜膜。
梳子下缘出现气泡：解决方法是先插一侧梳子再插另一侧。
4、拔梳子后泳道有胶丝
原因：TEMED用量过多导致胶凝固过快。
解决方法：减少TEMED用量。
5、拔梳子后泳道歪斜
原因：梳子与玻璃板不匹配。
解决方法：在灌胶前先测试梳子是否与玻璃板匹配。
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3、 应急必备：
当您的配胶出现泳道歪斜时，至少能确保抗体数据可靠
