发布时间：2025-05-28
还在为Western Blot抗体孵育方式纠结吗？每次实验都在为选择整膜孵还是裁膜孵而犹豫不决？本文将为你全面解析这两种方法的优劣，提供详细操作指南，并分享实验室老司机的实用技巧，助你轻松搞定WB实验，获得漂亮的条带！
WB抗体孵育的两种主要方式
整膜孵和裁膜孵
1.整膜孵
整膜孵就是整张膜孵一个抗体或者一个目的+一个内参。
PS：把一整张膜裁开了再拼成一张那不叫整膜。
优点：
可以满足某些期刊投稿的投稿要求
如果是新手的话，第一次做实验的时候整膜敷可以帮助确定目的蛋白所在的位置，不会有裁膜孵把目的蛋白裁掉的风险
有的蛋白会在多个分子量处有表达，可以根据整膜孵的结果判断目的蛋白在哪个位置的表达更为明显
缺点：
费时费力费钱（主要是费抗体）
2.裁膜孵
裁膜孵是指将膜根据蛋白的分子量大小裁开，分别进行孵育。
优点：
节省抗体，降低实验成本
可针对不同蛋白优化孵育条件
实验效率更高
缺点：
需要熟练的实验技巧
存在裁膜不当导致蛋白丢失的风险
裁膜孵是指将一张膜根据maker指示的分子量大小将不同大小的目的蛋白裁开，分别孵育对应的目的蛋白。
-参考操作方法-
① 跑胶
不管是整膜还是裁膜，都是一样的操作
② 转膜
如果是整膜孵当然也就是整膜转，如果是分开孵抗体的话，此处就有两种方法可供选择：
切胶裁膜分开转：就是根据Maker的位置把除目的蛋白以外的区域切掉，用直尺测量长和宽，然后根据测量结果去裁对应大小的膜（如果这样操作，可以适当的将胶和膜切宽一点，一般在目的蛋白所示位置上下0.5cm切不会出问题。）
整膜转后裁：整膜转，转完以后再裁膜
新手建议：个人比较推荐先整膜转封闭完之后再裁膜，可以有效避免把胶切得稀碎，胶是脆的，膜是软的，所以建议切膜不切胶。
③ 封闭
如果前面是整膜转的，那么裁膜在封闭前和封闭后进行均可。推荐先整膜转封闭完之后再裁膜，可以有效避免把胶切得稀碎，胶是脆的，膜是软的，所以建议切膜不切胶。整膜封闭还有一个好处是比较节约封闭液。
④ 孵一抗
封闭结束后PBST/TBST 10min,洗3次后，切膜
所用器具：吸水纸、解剖刀、标记笔、可用于放膜切膜的硬物、直尺或可以辅助将膜切直的用具。
切完之后，根据正反前后做好标记，可以切完一个标记上就放到抗体对应的孵育盒内，也可以全部切完之后孵。
最后送大家实验玄学口诀：
"膜裁得好，条带跑不了；抗体省着用，数据更漂亮！"祝大家：实验不翻车，条带都清晰！投稿必accept，paper发不停！
